Linea de actuación:

Ecosistemas terrestres

Estado:

Finalizado

Fecha de ejecución:

2020

Fecha de finalización:

2022

Presupuesto total:

107.033,33 €

Importe de la ayuda de la Fundación Biodiversidad:

69.569.47 €

Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria (INIA-CSIC)

El visón europeo (Mustela lutreola) es una de las especies más amenazadas de Europa y se encuentra al borde de la extinción en la Península Ibérica. La precaria situación de la especie requiere la aplicación de nuevas metodologías de conservación ex situ que complementen las medidas de conservación existentes.

Según el INIA, la creación de un banco de recursos genéticos del visón europeo y su caracterización celular contribuye a evitar la pérdida irreversible de biodiversidad que se produce con la muerte de cada ejemplar en libertad, en zoológicos o en las granjas de cría. Además, facilita el cumplimiento del principio de “las 3 Rs” (refinamiento, reducción y reemplazo), posibilitando el desarrollo in vitro de estudios biológicos, genéticos, toxicológicos y epidemiológicos, así como su empleo en tecnologías de reproducción asistida como la clonación mediante la transferencia nuclear de células somáticas.

El objetivo del proyecto es la conservación ex situ del visón europeo mediante la creación de un banco de recursos genéticos de la especie, integrado por ovocitos, células troncales mesenquimales y cultivos primarios epiteliales; y su aplicación al estudio de epizootias virales relevantes para la especie.

Sus objetivos específicos son:

• Generar un banco de recursos genéticos de la especie a partir de distintos tejidos de ejemplares hallados muertos y a partir de muestras de sangre de los ejemplares vivos de los centros de cría.
• Caracterización de los distintos cultivos primarios ya establecidos, así como de los ovocitos y los cultivos primarios futuros que se obtengan.
• Desarrollar modelos in vitro de infección con el parvovirus de la enfermedad Aleutiana (ADV) en las distintas líneas celulares aisladas.

• Aislamiento de ovocito a partir de ejemplares hembra hallados muertos.
• Aislamiento de células troncales mesenquimales (MSC).
• Aislamiento de cultivos primarios epiteliales a partir de piel (sEC) y oviducto (oEC) de ejemplares hallados muertos.
• Clasificación de los ovocitos aislados según criterios morfológicos de calidad establecidos para la especie canina, dada su proximidad filogenética y criopreservación mediante vitrificación.
• Caracterización morfológica de los cultivos primarios establecidos, expansión celular y criopreservación seriada hasta pase celular 5.
• Caracterización inmunocitoquímica de los cultivos primarios establecidos mediante citometría de flujo y microscopía de fluorescencia con marcadores de superficie e intracitoplasmáticos propios de células epiteliales y mesenquimales.
• Caracterización del grado de pluripotencia de las distintas líneas MSC mediante fosfatasa alcalina (AP).
• Caracterización del grado de pluripotencia de las líneas MSC mediante ensayos de diferenciación in vitro hacia linajes celulares adipocíticos, condrocíticos y osteocíticos.
• Evaluación de MSC de visón europeo como potenciales herramientas de diagnóstico e investigación in vitro frente a la infección con SARS-CoV-2.
• Divulgación y comunicación del proyecto.

• Se ha establecido por primera vez un biobanco de células troncales mesenquimales y ovocitos de visón europeo, de especímenes encontrados muertos en la Península Ibérica, libres y en cautividad.
• Se han aislado nuevas líneas de células mesenquimales de diferentes tejidos: médula ósea, mucosa oral, dermis cutánea, oviducto, endometrio, testicular y tejido adiposo de dos depósitos diferentes, subcutáneo y ovárico.
• El biobanco de visón europeo facilitará la conservación de la variabilidad genética de la especie, la aplicación de técnicas de reproducción asistida y el desarrollo de modelos in vitro para el estudio de los mecanismos moleculares de las enfermedades infecciosas que amenazan la precaria situación de la especie.